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(铜还原直接滴定法：斐林试剂直接滴定法)? 目的及原理：? 测定果蔬及其加工品中糖分含量的基本原理，是根据还原糖(果糖和葡萄糖)可以还原斐林试剂而生成氧化铜这一特性。? 斐林试剂由甲乙二种溶液混合而成，试剂甲为硫酸铜溶液，试剂乙为氢氧化钠与酒石酸钾钠的混合液，甲乙二液混合后，硫酸铜与氢氧化钠生成氢氧化铜沉淀。? CuSO4+2NaOH Na 2SO4+Cu(OH)2? 氢氧化铜在酒石酸钾钠存在时呈溶液状态：? HO—CH—CK O—CH—COOK Ca Cu(OH)2+ HO—CH—COONa O—CH—COONa+2H2O 此溶液与还原糖作用，在加热滴定时即产生红色的氧化亚铜沉淀：? O ∥ O—CH—COOK CH2OH(CHOH)4C ﹨H + 2Cu O—CH—COONa +2H2O→CH2OH(CHOH)4COOH + Cu2O HOCHCOONa +O HOCHOOK 滴定终点可以借有机染料次甲基蓝作指示剂来决定，次甲基蓝在碱性溶液中被过量的还原糖还原成“无色染基”，溶液的蓝色即行消失，但无色染基在常温下极易被大气中氧所氧化变成原来的蓝色，故滴定时瓶中溶液须保持沸腾状态，以免影响滴定结果。? 蔗糖转化后，所得转化糖的重量增加，计算时应将转化糖量减去水解前还原糖量再乘以0.95，才是实际的蔗糖量。? 主要仪器：恒温水浴锅、分析天平、酒精灯等。? 试剂： 配制(1)斐林试剂甲：溶解硫酸铜34.639克于500ml容量瓶中，加水稀释至刻度。? (2)斐林试剂乙：溶解酒石酸钠173克(或用25克甘油代替)及氢氧化钠50克于500 毫升容量瓶中，加水稀释至刻度静置1—2日，用石棉过滤后备用。? (3)标准转化糖及斐林试剂的标定：称取纯蔗糖9.5克溶于50ml水中，加6mol/L盐酸5ml，在20—25℃室温下静置五天(或者煮沸15分钟)，使蔗糖转化，冷却后移入1000ml容量瓶中，加水稀释至刻度，再由稀释了的糖液中吸取100ml放入500ml的容量瓶中，加1%酚酞2—3滴，以6mol/L氢氧化钠溶液中和后加水稀释至刻度，即为转化糖溶液。此液1ml含转化糖2毫克。? 吸取配制的斐林试剂甲乙各5ml，混合于250ml三角瓶中，由滴定管中滴入标准转化糖液10ml，在酒精灯上加热至沸，加次甲基蓝指示剂2—3滴，再由滴定管中徐徐滴入糖液，至蓝色完全褪尽，溶液呈清亮为止，根据滴定所用转化糖毫升数，校正斐林试剂10毫升相当的转化糖克数。注意全部滴定过程在沸腾状态下进行。? (4)6mol/L氢氧化钠? (5)6mol/L盐酸? (6)1%次甲基蓝指示剂? (7)中性醋酸铅? (8)无水硫酸钠(少量)? 操作步骤?样品中含糖量的测定：? (1) 样品液的配制：称取切碎后的果蔬样品20克(或果脯5克)置研钵中磨碎，倒入250ml容量瓶中，加水稀释至刻度(如果表面有气泡可以加酒精数滴以除气泡)，经10—15分钟浸渍，将样品液过滤于干燥的三角瓶中备用。? 如蛋白质含量多的样品，在定容以前加2—5ml中性醋酸铅以除蛋白质，摇动混合10分钟后加水稀释至刻度，过滤，并以无水硫酸钠1—2克以除去过量的铅盐。 (2) 还原糖的测定：吸取配好的样品液50ml放于100ml容量瓶中(要求每ml稀释后的样品液约含4mg的还原糖)，加水稀释至刻度，混合均匀后移入滴定管中备用。吸取斐林试剂甲乙各5ml，混合于三角瓶中先由滴定管中滴入样品液5—6ml，在酒精灯上加热至沸，加次甲基蓝指示剂2—3滴，继续由滴定管中徐徐滴入样品液，至蓝色褪尽，溶液呈清亮时为止，记下消耗的样品液亳升数，重复滴定三次(每次相差应不超过用量的3%)取其平均值用下列公式计算：? W=A/B×b/a×100? W—100克样品中含还原糖的克数? A— 斐林试剂10毫升相当的还原糖克数 B— 滴定时所用样品液的毫升数? a— 样品的克数? b— 样品稀释的总毫升数? (3) 蔗糖的测定：吸取上述配好的样品液50ml，移入100ml容量瓶中，加6mol/L的盐酸5ml置于水浴锅中煮沸10分钟，冷却后加入酚酞指示剂2—3滴，以6mol/L氢氧化钠中和，加水稀释至刻度，混合均匀倾入滴定管中，用已知斐林试剂如上法测定，并算出蔗糖含量。? 计算公式：? W=(S2-S1)×0.95? W—100克样品含蔗糖的克数? S1—水解前100克样品中含的还原糖克数? S2—水解后100克样品中含的转化糖克数? (4) 总糖含量%=蔗糖%+还原糖%? | 
发表于 2012-4-19 08:24:02
