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本法测定的含氮物质不包括非蛋白质物质。因此通过蛋白质换算因数而得到的是纯蛋白质%。? 试剂配制? (1) 6%硫酸铜 60gCuSO4·5H2O溶于1L水中。? (2) 1.25%氢氧化钠 12.5gNaOH溶于1L水中。? (3) 浓硫酸? (4) 混合催化剂 称取硫酸钾(或硫酸钠)100g,硫酸铜10g，均匀混合后研细(通过0.177mm孔径)，贮于瓶中。 (5) 0.025—0.05mol/L硫酸标准液? (6) 0.005—0.01mol/L硫酸标准液? 测定步骤称取1.000—2.000g经过0.42mm孔径的风干样品，于150ml烧杯中加约50ml热水，放入40—50℃的水浴上加热10min。烧杯内物质还未冷时，随即加25ml16%硫酸铜溶液，然后一边搅拌，一边缓缓注入25ml1.25%氢氧化钠溶液。如此形成的碱式硫酸铜［CuSO4·Cu(OH)2］将使样品中的蛋白质沉淀。可用石蕊试纸在烧杯中检查，溶液不应是碱性反应。因为碱性反应会引起凝结的蛋白质溶解。放置0.5—1h(也可放置过夜)，用倾泻法过滤，即将沉淀上部液体沿玻棒倒到漏斗中，沉淀留在烧杯中用热水洗几次，而后将沉淀不损失地移至漏斗上，并继续用热水洗至滤液遇5%氯化钡不再产生硫酸钡白色沉淀为止。此时间接指示非蛋白质含氮物已被洗净。? 将带有沉淀的漏斗在50—60℃烘干，直到失去大部分水，将滤纸及内容物从漏斗上取下，并卷成筒状，毫无损失地移入250ml开氏瓶中，用量筒加入浓硫酸20—30ml，放置2h或过夜。加入1：10硫酸铜—硫酸钾5g，倾斜置于电炉上先用小火加热，逐渐升温(避免黑色物升于瓶外)，直至出现白色蒸气后才可加大火力使沸腾，消煮至溶液呈透明的淡绿色，再消煮30min。取下凯氏瓶，冷却，用蒸馏水将消煮液一起洗入250ml容量瓶中，冷却至室温后，用水定容、摇匀。? 吸取5—10ml待测液用半微量法测氮(含氮约0.5—1mg)。用普通定氮装置时，可吸取25—50ml(含氮约10—20mg)。测定同时作空白试验。 注释 所获蛋白质沉淀不必烘至过干，以免沉淀发脆，塞入开氏瓶时容易损失。只须烘至将滤纸卷成筒状而无水分渗出即可。? ? 表 各种作物收获物中蛋白质的含量范围(千重%) | | | | 菜豆 洋扁豆 豌豆 蚕豆 大豆 亚麻 向日葵(种仁) 棉花(种仁) 花生(种仁) 小麦 黑麦 大麦 燕麦 稻 (种仁) 玉米 小米(种仁) 高梁 荞麦(种仁) | 15.0—30.5 24.6—34.1 24.0—34.0 27.0—35.0 29.4—50.4 2.00—30.8 21.1—30.2 28.6—42.0 19.3—30.0 14.4—24.1 8.3—19.4 10.6—20.4 8.0—17.3 7.8—14.5 9.0—13.2 10.2—21.5 9.5—15.3 12.8—19.0 | 马铃薯? 冬油菜? 甜菜? 萝卜? 胡萝卜 洋葱? 大蒜? 菠菜 芹菜? 蕃茄? 茄子? 辣椒? 南瓜? 黄瓜? 甘蓝? 花椰菜? 浆果? 核桃 高梁叶 高梁茎 | 0.7—2.7? 1.0—1.5? 0.7—1.4? 0.6—1.2? 0.6—1.9? 1.9—2.8? 0.7? 2.3? 1.3—3.6? 0.3—0.8? 0.6—1.2? 0.7—1.1? 0.4—1.0? 0.5—0.9? 1.2—2.6? 2.4? 0.3—1.9? 16.1—28.9?12.4—17.5 4.0—7.5 |
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发表于 2012-4-19 08:21:37
